Электрофорез полиакриламидного геля додецилсульфата натрия для анализа белков: метод разделения и визуализации белков на основе молекулярной массы

Начните с обработки образца белка денатурирующим буфером, содержащим детергент - додецилсульфат натрия, SDS, и восстановитель - бета-меркаптоэтанол. Слегка нагрейте его. На этой стадии бета-меркаптоэтанол разрушает дисульфидные связи, придавая белку развернутую конформацию.

Развернутые белки с обнаженными гидрофобными аминокислотами связываются с отрицательно заряженными SDS и приобретают равномерный отрицательный заряд. Добавьте в образец подходящий следящий краситель для визуализации в режиме реального времени.

Теперь загрузите образец и стандартный маркер молекулярного размера в отдельные лунки, присутствующие в стекирующем геле - верхнем слое полиакриламидного геля, содержащем меньшую концентрацию сшитых акриламидных полимеров.

Подключите заполненный буфером гелевый аппарат к источнику питания.

В присутствии электрического поля отрицательно заряженные белки свободно мигрируют к аноду и укладываются вместе, чтобы войти в разрешающий гель — нижний слой, содержащий гель с более высокой концентрацией.

В рассасывающемся геле белки начинают мигрировать в соответствии с их молекулярным размером, при этом более мелкие белки мигрируют быстро, что приводит к оптимальному разрешению белко