Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:34 мин. • July 8th, 2025
Для начала возьмем образец, содержащий флуоресцентно меченные фосфорилированные и нефосфорилированные олигонуклеотиды РНК, смешанные с нагрузочным красителем, содержащим мочевину. Нагрейте образец.
Мочевина - прочный денатурант - в сочетании с теплом денатурирует структуру вторичной РНК, что приводит к ее линеаризованной и неструктурированной конформации. Теперь отливаем гель, смешивая акриламидно-бисакриламидный раствор с мочевиной.
Добавьте тетраметилендиамин, катализатор, и персульфат аммония, окислитель, чтобы облегчить последующую полимеризацию геля.
Перелейте раствор в заранее собранный кассетный аппарат. Вставьте гребень, создав лунки для загрузки пробы. Дайте гелю полимеризоваться. Поместите кассету в гелевый аппарат. Добавьте в верхний и нижний резервуары бегущий буфер, поддерживая протекание тока через весь гель. Снимите расческу.
Загрузите образец, смешанный с красителем для визуализации, в лунку и подключите гель к источнику питания с нужным напряжением. Мочевина в геле позволяет молекулам РНК мигрировать в виде линейных веществ.
Гель действует как сито, позволяя отрицательно заряженным молекулам РНК двигаться через поры к положительному электроду. Во время прогона фосф
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео