Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:06 мин. • July 8th, 2025
Амилоидные волокна представляют собой агрегаты неправильно свернутых белков, которые демонстрируют неоднородность по размеру. Эти волокна, будучи устойчивыми к анионным моющим средствам, таким как SDS, могут быть проанализированы с помощью двумерного электрофореза на основе полуденатурирующего агарозного геля.
Для начала возьмите предварительно собранный агарозный гель размером с большие поры, который содержит SDS. Высокая пористость позволяет отделять неповрежденные волокна во время работы. Наложите на гель работающий буфер, содержащий SDS.
Загрузите в гель лизат клеток, содержащий амилоидные волокна. Наличие SDS и отсутствие стадии нагрева образца создает условия полуденатурации, в которых моющее средство связывается с высокостойкими амилоидами, придавая равномерный отрицательный заряд неповрежденным волокнам.
Запустите гель в первом измерении при соответствующем напряжении. Электрическое поле вызывает миграцию отрицательно заряженных амилоидов к положительно заряженному аноду.
Во время прогона более мелкие волокна мигрируют быстрее по сравнению с более крупными, образуя мазкообразный полосовой рисунок, указывающий на неоднородность размеров.
По завершении поверните гель перпенди
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео