Электрофорез из синего нативного полиакриламидного геля: метод неденатурирующего разделения для анализа интактных комплексов митохондриальных дыхательных цепей

Проанализировать пять митохондриальных комплексов дыхательной цепи с интактными субъединицами, получить митохондриальные комплексы, солюбилизированные в мягком, неионогенном детергенте. Смешайте с буфером, содержащим анионный краситель Coomassie Blue-G.

Кумасси заменяет моющее средство и неспецифически связывается с комплексами, придавая отрицательный заряд и окрашивая их в синий цвет. Кроме того, кумасси предотвращает агрегацию комплексов и помогает сохранить их естественную структуру и функцию.

В резервуаре для электрофореза соберите гелевую кассету, состоящую из градиентного разрешающего геля с уменьшающимся размером пор по длине, покрытого гелем с большими порами. Заполните анодную и катодную камеры охлажденным анодом и катодным буфером, содержащим Кумасси.

Загрузите в лунки смесь связанного белка Кумасси. Инициируйте электрофорез.

Отрицательно заряженные белковые комплексы мигрируют из стекирующего геля в градиент-разрешающий гель к положительно заряженному аноду. В то время как более мелкие комплексы быстро проходят через поры, более крупные комплексы замедляются из-за ограничения размеров пор по мере их продвижения вниз по рассасывающему гелю.

Кумасси, диссоциированный от ко