Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:29 мин. • July 8th, 2025
Чтобы определить размер фрагментов ДНК с помощью капиллярного электрофореза, начните с взятия многолуночного аналограммы. Каждая лунка содержит флуоресцентно меченные, разного размера ампликоны ПЦР – двухцепочечные олигонуклеотиды ДНК, полученные после цикла ПЦР.
Добавьте в лунку несколько двухцепочечных фрагментов ДНК разного размера, которые действуют как стандарт размера. Каждая из этих молекул ДНК несет флуоресцентную метку для легкой идентификации.
Дополните лунку формамидом, крепким денатурантом, и нагрейте при высокой температуре. На этом этапе происходит денатурация ДНК, образуя одноцепочечные фрагменты, которые могут легко мигрировать через гелевые поры.
Поместите пластину в блок анализатора фрагментов, который содержит предварительно введенный полимерный гель внутри его капиллярной системы.
Подайте высоковольтное усилие для электрокинетического введения ДНК из лунки в капилляр тонкого диаметра на катоде - отрицательном конце. Отрицательно заряженные молекулы ДНК мигрируют к положительно заряженному аноду. Более короткие нити ДНК сталкиваются с меньшей силой трения и быстрее перемещаются через гель, чем более длинные нити ДНК.
Во время электромиграции ДНК пересекает путь л
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео