Щелочной гель-электрофорез: чувствительный метод количественной оценки повреждения ДНК в отдельных раковых клетках после химиотерапии

Химиотерапевтические препараты вызывают одно- и двухцепочечные разрывы ДНК в раковых клетках, вызывая повреждение ДНК и гибель клеток.

Чтобы количественно оценить повреждение ДНК, смешайте обработанные химиотерапией раковые клетки с расплавленной легкоплавкой агарозой. Нанесите эту смесь пипеткой на предметные стекла с предварительно покрытым агарозой покрытием. Дайте расплавленной агарозе застыть, встраивая клетки в пористую гелевую матрицу.

Обработать лизисным буфером, содержащим высокие концентрации моющих средств и солей. Детергенты растворяют клеточные и ядерные мембраны. Кроме того, высокое содержание соли отделяет гистоновые белки от ДНК, оставляя суперспиральную ДНК, прикрепленную к ядерной матрице.

Инкубировать в щелочном буфере для электрофореза. Щелочная среда заставляет суперспирали ДНК раскручиваться, обнажая одноцепочечные и двухцепочечные разрывы ДНК.

Поместите предметные стекла в гелевый лоток с буфером для электрофореза. Инициируйте электрофорез.

Будучи отрицательно заряженной, ДНК притягивается к положительному аноду. Поврежденные фрагменты ДНК мигрируют из ядра и путешествуют через пористую гелевую матрицу, при этом более длинные фрагменты движутся медленнее, чем