Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:44 мин. • July 8th, 2025
Мультимерные белки стабилизируются межмолекулярными, ковалентными, дисульфидными связями между их цистеиновыми остатками, что имеет решающее значение для поддержания их структурной и функциональной целостности.
Для анализа таких комплексов с помощью невосстановительного ПЕЙДЖ берут нужную концентрацию дисульфид-стабилизированных белков. Добавьте буфер для проб без восстановления и нагрейте образец.
Этот буфер содержит SDS, который придает белкам общий отрицательный заряд, и отслеживающий краситель для визуализации их движения в геле. В буфере отсутствует какой-либо восстановитель, что позволяет дисульфидным связям оставаться неповрежденными, способствуя сохранению мультимерного комплекса в целости.
Загрузите отдельные комплексы в лунки полиакриламидного геля нужного процентного соотношения, предварительно собранного в гелевом аппарате. Добавьте в другую лунку белковую лестницу известного размера. Погрузите скважины в работающий буфер на основе SDS и подключите аппарат к источнику питания.
Электрический ток заставляет отрицательно заряженные белковые комплексы двигаться через поры геля к аноду - положительному выводу. Поскольку белковые комплексы равномерно отрицательно заряжены, ра
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео