Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 7:37 мин. • July 8th, 2025
Для двумерного гель-электрофореза белковой смеси, полученной из гомогенизированной опухолевой ткани, обрабатывают буфером, содержащим хаотропы, цвиттерионное детергент и восстановитель. Хаотропы и моющие средства денатурируют и растворяют белки. Восстановители уменьшают дисульфидные связи белков, генерируя свободные тиоловые группы и разворачивая белки для оптимального разрешения белка.
Переложите обработанную белковую смесь в иммобилизованный держатель для градиента pH, IPG, стрип. Поместите полоску IPG, содержащую линейный градиент pH, внутрь матрицы акриламидного геля. Добавьте минеральное масло для предотвращения испарения белкового раствора. Перевести держатель в изоэлектрическую фокусировку, систему ИЭФ. Дайте белковому раствору регидратировать полоску.
Выполнение IEF первого измерения. Электрический ток заставляет заряженные белки мигрировать через градиент pH к противоположно заряженным электродам, обездвиживая их соответствующие изоэлектрические точки - pH, при которых белки имеют нулевой суммарный заряд.
После ИЭФ обработайте полоску IPG додецилсульфатом натрия, SDS, анионным моющим средством, которое придает отрицательный заряд белкам. Уравновешивайте с помощью алкилирую
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео