Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:16 мин. • July 8th, 2025
Фосфолипиды – это комплексные липиды, содержащие фосфатные группы. Эти молекулы гидролизуются ферментом под названием фосфолипаза.
Для проведения анализа на активность фосфолипазы берут эмульсию яичного желтка, богатую фосфолипидами, которые выступают в качестве субстрата для фермента. Добавьте желток в теплый раствор агарозы, содержащий хлорид натрия, который усиливает стабильность белков желтка во время последующих этапов.
Дополните смесь хлоридом кальция и флуоресцентным красителем – родамином. Вылейте смесь в тарелку Петри. После затвердевания фосфолипиды желтка остаются равномерно распределенными в матрице агарозного геля.
С помощью трубки создайте в геле лунки на соответствующем расстоянии. Добавьте в лунки экстракт сырого белка, содержащий фосфолипазу, в различных концентрациях. Инкубируйте тарелку при физиологической температуре.
Фосфолипаза из экстракта диффундирует радиально в гель. Ионы кальция в геле связываются с фосфолипазой, активируя ферменты. Этот фермент расщепляет фосфолипиды, образуя свободные жирные кислоты. Молекулы родамина в геле образуют комплекс с высвобождающимися жирными кислотами.
При освещении ультрафиолетовым светом наблюдайте появление флуоресцентных
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео