Анализ хиральности клеток с кольцевым микропаттернированием: метод in vitro для определения многоклеточной хиральности на основе выравнивания клеток на кольцеобразных микропаттернах

Чтобы определить хиральность клеток млекопитающих in vitro - смещение клеток влево и вправо в ориентации влево или вправо в ограничивающих условиях - начните с изготовленных на заказ предметных стекол с золотым покрытием в многолуночном планшете, содержащем среду. Слайды содержат микроузоры кольцеобразных островков фибронектина, способствующего клеточной адгезии, заполненных самоорганизующимся монослоем, устойчивым к клеточной адгезии.

Затем засейте соответствующий объем суспензии клеток млекопитающих на предметные стекла и инкубируйте. Клетки адсорбируются на микропаттернах фибронектин-содержащего кольца. Окружающий самоорганизующийся монослой предотвращает прикрепление неспецифических клеток за пределами кольцевых границ.

Замените носитель, удалив все неприкрепленные элементы, на свежий носитель. Добавьте в один набор предметных стекол препарат, интерферирующий актин, и инкубируйте.

Адгезивные клетки пролиферируют, распространяются и принимают форму нижележащих фибронектиновых островков, реорганизуя свои актиновые волокна в ответ на пространственные сигналы, которые ограничивают монослой клетки, способствуя смещенному выравниванию.

Теперь обработайте предметные стекла параформаль