Анализ поглощения внеклеточных везикул: метод визуализации и количественной оценки клеточного поглощения внеклеточных везикул с использованием метода 3D-флуоресцентной визуализации

Для облегчения клеточной коммуникации клетки выделяют внеклеточные везикулы, ВВ – наноразмерные структуры, окруженные липидной мембраной. Электромобили перевозят различные биологические грузы, в том числе макромолекулы и метаболиты, для доставки их к клеткам-реципиентам.

Чтобы визуализировать поглощение ВВ клетками с помощью конфокальной микроскопии, сначала возьмите свежевыделенные ВВ. Эти EV предварительно помечены антителами, связанными с флуоресцентным зондом для последующей легкой визуализации.

Добавьте достаточное количество меченных флуоресцентно меченных ВВ в адгезивную культуру клеток-реципиентов. Высиживайте в течение нужного срока. Во время инкубации субпопуляция меченых ВВ поверхностно прикрепляется к поверхности клетки, в то время как другие ВВ усваиваются.

Добавьте другой флуоресцентный краситель для маркировки цитоплазмы клетки, помогая отличить интернализованные ВВ от тех, которые прилипли к клетке-реципиенту. Поместите ячейки под конфокальный микроскоп и получите изображение в разных фокальных плоскостях вдоль оси z, получая серию оптических сечений по всей толщине образца.

Скомпилируйте эту коллекцию оптических сечений - z-стек - для формирования трехмерного изобр