Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:04 мин. • July 8th, 2025
Начните с монослоя эпителиальных клеток в подходящей питательной среде. Эти клетки экспрессируют интегрины – мембранные поверхностные рецепторы. Питательная среда содержит секретируемый эпителиальными клетками фибронектин – гликопротеин.
Добавьте в культуральную тарелку суспензию золотистого стафилококка – грамположительной патогенной бактерии. Эти бактерии содержат фибронектин-связывающие белки, или FnBP, закрепленные в их клеточной стенке.
Инкубируйте планшет, чтобы инициировать бактериальную инфекцию, при которой фибронектин связывается с FnBP бактерий и интегринами на эпителиальных клетках-хозяевах. Это трехстороннее взаимодействие FnBP-фибронектин-интегрин опосредует интернализацию бактерий в организме хозяина.
Обработайте клетки лизостафином — ферментом эндопептидазы — и инкубируйте. Лизостафин избирательно проникает в клеточные стенки внеклеточных бактерий. Он расщепляет пентаглициновые мостики в пептидогликанах, тем самым лизируя их, в то время как внутриклеточные бактерии остаются защищенными от лизостафина.
Дополните культуру протеолитическим ферментом, чтобы деактивировать оставшийся лизостафин, предотвращая его уничтожение внутриклеточных бактерий на этапах.
Добавьте в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео