Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:03 мин. • July 8th, 2025
В тканях железо, важный минерал, критически важный для различных метаболических процессов, обычно присутствует в секвестрированном до гемопротеинов и негемовых белков железа. Гемопротеины включают двухвалентное или гемовое железо, связанное с порфириновыми кольцами, в то время как негемовые белки железа не имеют структуры порфиринового кольца и в основном состоят из трехвалентного или негемового железа.
Чтобы оценить содержание негемового железа в ткани печени мыши, обработайте высушенный, собранный фрагмент ткани печени мыши низкими концентрациями соляной кислоты и трихлоруксусной кислоты. Инкубируйте при высоких температурах, чтобы переварить ткань и способствовать выпадению белка, вызванного кислотой.
Благодаря низким концентрациям кислот негемовое железо высвобождается из связанных с ним белков. Гемовое железо, будучи связанным с порфириновым кольцом, остается незатронутым.
После охлаждения переложите нужный объем надосадочной жидкости, содержащей негемовое железо, в многолуночную пластину. Добавьте в подходящий буфер хромогенный хелатор железа, сульфонат батофенантропината, BPS, дополненный тиогликолевой кислотой, восстановителем и инкубируйте.
Тиогликолевая кислота восстанавл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео