Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:46 мин. • July 8th, 2025
Остеокласты, многоядерные макрофаги, способствуют резорбции кости – расщеплению костной ткани и высвобождению костных минералов.
Для количественного определения резорбции остеокластов in vitro культивировали мононуклеарные клетки периферической крови человека в макрофагальном колониестимулирующем факторе, M-CSF, содержащем среды для дифференцировки в клетки-предшественники остеокластов и прикрепления. Соберите прародители остеокластов и центрифугу.
Пипеткой пипетку суспензию ресуспендированных клеток в среде, дополненной М-КСФ и рецепторным активатором лиганда ядерного фактора каппа-Β RANKL, в лунки многолуночных планшетов, покрытых фосфатом кальция, имитирующими неорганический костный компонент. M-CSF и RANKL вызывают дифференцировку предшественников остеокластов и слияние в остеокласты, активируя резорбцию.
Активированные остеокласты прикрепляются к покрытию фосфата кальция, реорганизуя их цитоскелет, образуя богатую актином зону уплотнения, и развивают взъерошенные границы, которые выделяют протоны и кислотные гидролазы. Образующаяся кислая среда растворяет кальций-фосфатное покрытие, высвобождая ионы кальция и фосфата и образуя резорбционную яму.
После инкубации лунки промыть,
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео