Анализ окисления субстрата в культивируемых клетках: анализ in vitro для количественной оценки окисления субстрата в клетках путем измерения радиоактивных сигналов от захваченного CO₂

В метаболически активных клетках углеродсодержащие субстраты окисляются с помощью ряда биохимических реакций для получения энергии и высвобождения углекислого газа в качестве побочного продукта.

Чтобы определить скорость окисления субстрата, начните с адгезивной культуры желаемых недифференцированных клеток. Дополните клетки в среде подходящим субстратом, содержащим четырнадцать радиоактивных углеродов в их основе, и инкубируйте.

Клетки потребляют субстрат и окисляют его, выделяя меченый углекислый газ, который диффундирует из клеток в окружающую среду.

Переведите эту среду в газоулавливающую сборку, содержащую хлорную кислоту, чтобы погасить реакцию. Эта трубка содержит фильтровальную бумагу, пропитанную гидроксидом натрия, установленную внутри крышки пробирки. Закройте крышку, и инкубируйте.

Во время инкубации углекислый газ, в газообразной форме, выделяется внутрь трубки. Гидроксид натрия поглощает меченый радиоактивными веществами углекислый газ, захватывая его в фильтровальную бумагу. Переложите эту фильтровальную бумагу во флакон со сцинтилляционным коктейлем и поместите его внутрь счетчика жидкого сцинтилляции.

Внутри счетчика радиоактивно меченый углерод подвергается радиоа