Анализ бислоя липидов со сферической опорой: метод наблюдения за сборкой септина на микросферах

Септины являются ключевыми белками цитоскелета, которые связываются с изогнутыми поверхностями плазматической мембраны.

Чтобы наблюдать за сборкой септина in vitro на микросферах, сначала возьмем суспензию микроскопических гранул кремнезема одинакового размера, действующих как твердая опора для образования бислоя. Вихревой удар этой суспензии должен разбить любые пучки валиков.

Дополняют его мелкими униламеллярными везикулами, внедорожники – сферическими пузырьками, окруженными одним липидным бислоем. Инкубируют при постоянном перемешивании, не допуская оседания микросфер.

Во время инкубации внешние полярные головные группы способствуют адсорбции внедорожников на поверхности гидрофильной микросферы. Это взаимодействие приводит к разрыву SUV с последующим слиянием липидов SUV с изогнутой поверхностью микросферы в виде непрерывного слоя, что приводит к образованию сферического поддерживаемого липидного бислоя, SLB.

Промойте, чтобы удалить излишки несвязанных липидов и повторно суспендировать в буфере для реакции. Перенесите сферическую суспензию SLB на небольшой участок поверхности, покрытой полиэтиленгликолем, чтобы предотвратить неспецифическую адсорбцию. Добавьте в камеру суспензи