Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:38 мин. • July 8th, 2025
Ядерные РНК-связывающие белки, RBP, представляют собой многофункциональные белки, состоящие из упорядоченных областей с четко определенной трехмерной структурой и менее стабильных, внутренне неупорядоченных областей, IDR.
При некоторых нейродегенеративных заболеваниях мутации, специфичные для IDR, приводят к тому, что RBP неправильно локализуются в цитоплазме и аберрантно вступают в слабые взаимодействия, образуя динамические безмембранные включения - явление, называемое разделением фаз. В конечном итоге эти включения созревают в токсичные, нерастворимые агрегаты, что приводит к дисфункции и дегенерации нейронов.
Чтобы исследовать разделение фаз RBP in vivo с помощью оптогенетики, начните с обезболиванной, дехорионированной трансгенной личинки данио-рерио, экспрессирующей IDR-мутированную RBP, слитую с флуоресцентным репортером и чувствительным к синему свету фоторецепторным доменом, в подходящем буфере.
Затем установите личинку лаконично на расплавленную агарозную каплю для визуализации спинного мозга. Дайте агарозе застыть, обездвижив личинку. С помощью конфокального микроскопа можно получить изображения спинного мозга для визуализации флуоресцентных RBP, локализованных в ядрах н
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео