Турбидиметрический анализ лизата амебоцитов лимулюса: метод обнаружения и количественной оценки загрязнения эндотоксинами в нанопрепаратах

Эндотоксин, грамотрицательный бактериальный токсин, присутствующий на внешней мембране, представляет собой липополисахарид, ЛПС, состоящий в основном из липидов и полисахаридов, включая липид А и О-антиген. При высвобождении во время инфекции он распознается иммунной системой, вызывая воспалительные реакции на основе цитокинов.

Для оценки контаминации эндотоксина в липосомальной лекарственной наноформе с использованием лизата амебоцитов Limulus, LAL, анализ, готовят реакционные пробирки, одна из которых содержит лекарственное средство, а другая содержит лекарственное средство, приправленное известной концентрацией эндотоксина.

Добавьте реагент LAL, содержащий лизат белка, полученный из мечехвоста, Limulus polyphemus, клеток крови или амебоцитов. Лизат включает в себя неактивные сериновые протеазы - фактор В, фактор С, фермент свертывания крови - и гелеобразующий белок коагулоген.

Сделайте трубки вихревыми и загрузите их в мутномер, чтобы измерить мутность растворов.

В присутствии загрязняющего ЛПС, связанного с липосомальными препаратами, ЛПС-чувствительный фактор С автоматически активируется, который затем расщепляет и активирует фактор В, который превращает фермент просвертывания