Анализ лизата амебоцитов Gel-Clot Limulus: метод обнаружения бактериального эндотоксина в составах наночастиц

Внешняя мембрана грамотрицательных бактерий содержит эндотоксины, называемые липополисахаридами, или ЛПС. ЛПС имеет гидрофильную олигосахаридную часть и гидрофобную липидную область А.

Попадая внутрь хозяина, ЛПС-связывающие белки распознают эндотоксины. Эти белки затем связываются с рецепторами на циркуляторных иммунных клетках. Это связывание активирует иммунные клетки, которые выделяют воспалительные факторы. Чрезмерное производство этих факторов усиливает иммунный ответ, вызывая гибель клеток.

Для обнаружения эндотоксинов с помощью лизата амебоцитов Limulus или анализа LAL используется состав, содержащий эндотоксины, связывающиеся с липофильной поверхностью наночастиц через их гидрофобные липидные части А.

Добавьте в пробирку реагент LAL. Этот реагент представляет собой водный лизат, содержащий неактивные ферменты и белки, полученные из амебоцитов - клеток крови мечехвоста.

Инкубируйте пробирку, чтобы облегчить связывание эндотоксинов с проферментом С, полученным из лизата, неактивным фактором свертывания крови, активируя его автокаталитически.

Активированный фактор С расщепляет другой профермент, фактор В, образуя протеазу, которая расщепляет просвертывающий фермент и превраща