Скрининговый анализ ферментов на основе хромогенного полимерного гидрогеля: высокопроизводительный метод скрининга углеводно-активных ферментов с использованием синтетических субстратов

Ферменты, расщепляющие углеводы, расщепляют сложные полисахариды на более мелкие олигосахариды.

Для скрининга активности фермента деградации начинают с приема множественных хромогенных полимерных гидрогелей CPH, которые получают путем окрашивания полисахаридов разноцветными хлортриазиновыми красителями. Затем каждый полисахарид химически сшивается с образованием гидрогеля - синтетического субстрата для ферментативного разложения.

Теперь распределите различные подложки CPH в отдельные лунки пористой реакционной пластины. Добавьте раствор для активации и инкубируйте его, чтобы обеспечить оптимальную активацию субстратов.

Положите пробирную пластину на пустую тарелку с продуктом. Центрифугируйте пластины вместе с низкой скоростью, чтобы обеспечить эффективное удаление активационного раствора через поры реакционной пластины.

Затем дополните все лунки реакционной пластины тем же типом фермента, разрушающего углеводы, в соответствующем буфере, который поддерживает оптимальный pH для ферментативной активности. Запечатайте планшет и инкубируйте его с легким перемешиванием, чтобы обеспечить равномерное распределение ферментов в полимерной сети, что позволит им получить доступ к субстрату.

В