Скрининг нерастворимых хромогенных ферментов на основе биомассы: анализ для оценки деградационной активности ферментов, разрушающих растительную биомассу

Биомасса — это органическое вещество растительного происхождения, состоящее в основном из сложных полисахаридов. Ферменты, разрушающие углеводы, действуют на эти полисахариды, производя более мелкие олигосахариды.

Чтобы оценить деструктивную активность фермента, начинают с забора различной нерастворимой хромогенной биомассы - субстратов ICB, присутствующих в лунках пористой реакционной пластины. Эти субстраты получают путем окрашивания материалов растительного происхождения красителем определенного цвета хлортриазином. Полученная биомасса содержит помеченные красителями сложные полисахариды, служащие субстратом для активности ферментов.

Теперь добавьте буферный раствор, содержащий фермент, гидролизующий углеводы. Буфер поддерживает pH для оптимальной активности ферментов. Поместите реакционную пластину в шейкер и инкубируйте. Постоянное перемешивание позволяет молекулам фермента достигать целевого полисахарида в субстрате ICB.

Во время инкубации гидролизующий фермент расщепляет ковалентные гликозидные связи внутри длинноцепочечных полисахаридов. В результате реакции образуются растворимые олигосахариды, связанные с молекулами красителя, которые остаются в растворе.

По завершении ра