Дифференциальное ядерное окрашивание: анализ для определения цитотоксичности митокана с помощью йодида пропидиума и двойного окрашивания по методу Хёхста

Митоканы — это класс препаратов, которые избирательно влияют на функционирование митохондрий в раковых клетках и индуцируют апоптоз.

Чтобы определить цитотоксичность митокана, засейте клеточную суспензию, содержащую полуадгезивные раковые клетки, в многолуночный планшет. Обработайте тарелку нужным раствором митокана и инкубируйте.

Митокан проникает в раковую клетку, нарушая ее митохондриальную активность, что в конечном итоге приводит к гибели чувствительных к митокану раковых клеток. Обработайте клетки окрашивающим раствором, содержащим смесь красителя Хёхста и йодида пропидиума.

Hoechst, мембранопроницаемый флуоресцентный краситель, проникает во все клетки и связывается с богатой AT-областью их ДНК, придавая синюю флуоресценцию ядрам как живых, так и мертвых клеток.

Напротив, йодид пропидия, непроницаемый для мембран флуоресцентный краситель, проникает исключительно в мертвые клетки через поврежденные участки их мембран. Краситель интеркалируется между основаниями ДНК, придавая дополнительную красную флуоресценцию мертвым клеткам. Присутствие обоих красителей в ядрах этих клеток заставляет мертвые клетки казаться фиолетовыми.

Центрифугируйте планшет на низкой скорости, чтобы осед