Анализ гемолиза: метод in vitro для измерения лизиса, индуцированного ионофором кальция в эритроцитах человека

Гемолиз – это разрыв эритроцитов с целью высвобождения их клеточного содержимого в окружающее пространство.

Чтобы определить гемолиз, начните с пробирки, содержащей эритроциты в безглюкозном, содержащем электролиты, изотоническом растворе по отношению к жидкостям организма. Этот раствор сохраняет эритроциты неповрежденными, а отсутствие глюкозы вызывает клеточный стресс. Это активирует катионные каналы, что позволяет ионам кальция проникать в цитозольное пространство клетки.

Добавьте раствор, содержащий оптимальную концентрацию ионофора кальция, который связывает ионы кальция и облегчает их транспортировку в цитозоль, вызывая перегрузку ионов кальция внутри эритроцитов.

Этот приток активирует скремблазу, белок, который перемещает фосфолипиды между липидными монослоями плазматической мембраны, нарушая ее асимметрию. Это явление также перемещает фосфатидилсерин, внутренний монослой фосфолипид, на внешний монослой, индикатор эриптоза – запрограммированной гибели эритроцитов.

Увеличение цитозольных ионов кальция активирует калиевые каналы и вытесняет ионы калия из клетки. Осмотический дисбаланс приводит к потере воды и сокращению эритроцитов. Более длительное воздействие ионофоров каль