Анализ связывания аннексина V: флуоресцентный метод идентификации апоптотических эритроцитов с помощью мечения фосфатидилсерином

При определенных патологических состояниях эритроциты или эритроциты претерпевают сокращение клеток, сопровождающееся транслокацией мембранного фосфолипида - фосфатидилсерина - из внутренней в наружную мембранную листку, приводящую к запрограммированной гибели клеток, эриптозу, запускающему макрофаг-опосредованный фагоцитоз клеток.

Чтобы измерить ионофор-индуцированный эриптоз в изолированной популяции эритроцитов человека с помощью анализа связывания аннексина V, начните с эритроцитов, взвешенных в буфере, не содержащем глюкозы.

Истощение глюкозы вызывает клеточный стресс, активируя цитозольную протеинкиназу С, которая впоследствии активирует кальциевые каналы и вызывает приток ионов кальция. Далее активируются калиевые каналы, что приводит к оттоку калия и сокращению клеток.

Далее добавьте ионофор кальция, который образует устойчивый комплекс с внеклеточными ионами кальция. Комплекс способствует цитозольному поступлению ионов кальция через клеточную мембрану, еще больше увеличивая внутриклеточную концентрацию кальция. Это, в свою очередь, активирует скрамблазу - двунаправленный транспортер фосфолипидов, который способствует транслокации фосфатидилсерина от внутренней к внешней ча