Анализ истощения глюкозы in vitro: флуоресцентный метод количественной оценки клеточного поглощения глюкозы с помощью измерения внеклеточного истощения глюкозы

Глюкоза, основной клеточный источник энергии, поступает в клетки через белки-транспортеры глюкозы на клеточных мембранах. Глюкоза расщепляется в цитоплазме клетки до пирувата через гликолитический путь, генерируя энергию с помощью аденозинтрифосфата, или АТФ, для клеточного метаболизма.

Чтобы измерить внутриклеточное поглощение глюкозы, начните с адгезивной культуры фибробластов в многолуночном планшете. Замените среду средой без глюкозы и инкубируйте. Клетки метаболизируют доступную глюкозу для производства энергии, достигая состояния глюкозного голодания.

Замените среды в одном наборе лунок на безглюкозные среды, содержащие инсулин, стимулятор поглощения глюкозы, и флуоресцентную дезоксиглюкозу, аналог глюкозы. Обработайте другой набор лунок безглюкозными средами, содержащими флуоресцентную дезоксиглюкозу.

Во время инкубации инсулин стимулирует транслокацию дополнительных транспортеров глюкозы к плазматической мембране, способствуя повышенному поглощению флуоресцентной дезоксиглюкозы в отсутствие глюкозы.

Дезоксиглюкоза фосфорилируется и не метаболизируется клетками дальше. Одновременно снижается внеклеточная концентрация флуоресцентной дезоксиглюкозы.

После инкубации соберите ср