Измерение истощения внеклеточных флуоресцентных аналогов глюкозы: метод суррогатных измерений для оценки поглощения глюкозы в органах мышей ex vivo

В тканях внеклеточная глюкоза поступает в клетки посредством облегченной диффузии через специфические переносчики глюкозы.

Глюкоза расщепляется до пирувата в цитоплазме клетки посредством гликолиза, метаболического пути, генерирующего энергию в форме аденозинтрифосфата, или АТФ, для клеточных метаболических процессов.

Чтобы измерить поглощение глюкозы ex vivo, начните со свежесобранной ткани печени мыши небольшого размера. Добавьте подходящий буфер для поддержания физиологического состояния.

Далее перенесите ткань в многолуночный планшет, содержащий среды, не содержащие глюкозы. После этого следует инкубация в средах, не содержащих глюкозу, с добавлением дезоксиглюкозы, аналога глюкозы с флуоресцентной меткой. Небольшой размер ткани допускает поступление дезоксиглюкозы.

Дезоксиглюкоза поступает в клетки через переносчики глюкозы, в отсутствие глюкозы. Внутри клеток дезоксиглюкоза фосфорилируется, но не метаболизируется дальше, что приводит к ее накоплению.

Соберите среды, содержащие неиспользованную флуоресцентно меченую дезоксиглюкозу, в желаемые моменты времени. С помощью считывателя микропланшетов измерьте флуоресценцию внеклеточной дезоксиглюкозы, которая может быть коррелирова