Анализ жизнеспособности люциферазы на основе АТФ: однородный метод оценки ингибиторного потенциала тест-агентов на опухолевых органоидах

Аденозинтрифосфат, АТФ, основной источник клеточной энергии, жизненно важен для различных клеточных функций. При стрессе внутриклеточный уровень АТФ подвергается негативному воздействию, что делает АТФ хорошим маркером для метаболически активных, жизнеспособных клеток.

Для начала засейте суспензию опухолевых клеток в микропланшет с черными стенками и прозрачным дном для минимального рассеяния света во время измерения интенсивности света. Микропланшет состоит из гидрогелевого покрытия, которое предотвращает прилипание клеток к пластине, обеспечивая межклеточное взаимодействие и самосборку в опухолевые органоиды – трехмерные культуры тканей, имитирующие микроокружение опухоли.

Далее обработайте тестовым составом. Исследуемое соединение взаимодействует с органоидными клетками и, в зависимости от его потенциала по ингибированию роста, может нарушать энергетически продуцирующие метаболические процессы, что приводит к истощению внутриклеточной АТФ.

После обработки добавьте одноэтапный реагент, состоящий из детергентов, ингибиторов АТФазы, фермента люциферазы, специфического субстрата люциферазы, люциферина и ионов магния. Инкубируйте в течение желаемой продолжительности.

Детергент раство