Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:00 мин. • July 8th, 2025
СУМОилирование происходит за счет присоединения небольших убиквитин-подобных модификаторов, СУМО, к белкам субстрата.
SUMOилирование происходит, когда зрелый пептид SUMO активируется ферментом - Е1. После активации SUMO переносится на активный центр конъюгирующего фермента - E2 - прикрепляя SUMO к остатку лизина белка субстрата. Другая лигаза - Е3 - повышает эффективность этого взаимодействия.
Чтобы провести анализ SUMOylation in vitro, начните с пробирки, содержащей смесь белка субстрата - p53, ферментов и пептидов SUMO, и инкубируйте для индуцирования SUMOylation. Дополните пробирку додецилсульфатом натрия - SDS-содержащим буфером, завершив реакцию. Нагрейте образец, чтобы денатурировать белки.
Загрузите белковую смесь в лунку геля SDS-PAGE и проведите электрофорез. Более высокомолекулярные SUMOylated белки движутся медленнее, чем их не-SUMOylated варианты, образуя две отдельные полосы.
Перенесите гель на промокательную мембрану, присутствующую на влажной фильтровальной бумаге в электроблоттинг-аппарате. Накройте влажной фильтровальной бумагой и проведите электроперенос белков из геля на мембрану.
Обработайте мембрану антителами против p53, которые связываются с p53. Наложение на
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео