Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:59 мин. • July 8th, 2025
Неправильно свернутые ядерные белки, не имеющие определенной третичной структуры, помечаются небольшими убиквитин-подобными модификаторами, SUMO и молекулами убиквитина, которые способствуют их деградации протеолитической системой, включая убиквитин-протеасомную систему UPS.
При некоторых нейродегенеративных заболеваниях дисфункция UPS вызывает накопление и агрегацию неправильно свернутых ядер белков, что приводит к гибели нейронов.
Чтобы исследовать скорость деградации неправильно свернутых ядер белков in vitro, обработайте культуру адгезивных клеток млекопитающих смесью, содержащей меченую флуоресцентно меченную неправильно свернутую плазмидную ДНК и трансфекционный реагент.
Успешно трансфицированные клетки экспрессируют меченые флуоресцентными белками с коротким периодом полураспада, помеченные сигналом ядерной локализации. При транспортировке в ядро эти неправильно свернутые белки подвергаются SUMOylation и убиквитинации и переносятся в UPS для деградации и выведения белка.
После инкубации замените среду средой с низкой флуоресцентностью, содержащей циклогексимид. Циклогексимид, проницаемая для клеток молекула, связывается с большой рибосомной единицей и блокирует фазу удлинени
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео