Анализ люциферазы: высокопроизводительный анализ для измерения люминесцентных сигналов с использованием биорепортеров на основе разработанной нанолюциферазной системы
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:36 мин. • July 8th, 2025
Люцифераза — это фермент, который окисляет свой субстрат с образованием биолюминесцентного продукта.
Это свойство люциферазы полезно для разработки репортерной системы на основе нанолюциферазы, в которой используется расщепленная версия фермента. В этой системе все более мелкие и крупные фрагменты обладают высоким сродством связывания друг с другом и могут восстанавливать функциональный фермент.
Чтобы использовать систему на основе нанолюциферазы для детектирования целевого белка - рецепторсвязывающего домена спайкового гликопротеина SARS-CoV-2 - начните с чашки для культивирования, содержащей адгезивные клетки. Эти клетки содержат плазмиду, кодирующую целевой белок, в сочетании с последовательностью, специфичной для меньшего фрагмента сконструированной нанолюциферазы.
При экспрессии культивируемые клетки продуцируют биорепортеры – рекомбинантные белки-мишени, слитые с меньшим фрагментом люциферазы. Обработайте клетки лизисным буфером и инкубируйте при перемешивании. Компоненты буфера быстро лизируют клетки, высвобождая клеточное содержимое, включая биорепортеры, в надосадочную жидкость.
Перенесите надосадочную жидкость на многолуночный планшет для анализа. Дополните каждую лунку р
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео