Биорепортерный анализ: чувствительный метод с использованием биолюминесцентной репортерной системы для обнаружения антител к SARS-CoV-2
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:11 мин. • July 8th, 2025
Во время инфекции, вызванной коронавирусом 2 тяжелого острого респираторного синдрома, или SARS-CoV-2, рецептор-связывающий домен вирусного шиповидного белка, RBD, связывается с ангиотензинпревращающим ферментом 2 клетки-хозяина, ACE2, облегчая проникновение вируса в клетки. В ответ иммунная система вырабатывает антитела, которые связываются с вирусным RBD и предотвращают проникновение в клетки, снижая инфекционность вируса.
Для выявления антител к SARS-CoV-2, нацеленных на RBD, берут рекомбинантную суспензию биорепортера, состоящую из фрагментов белка небольшого размера, слитых с RBD шипа SARS-CoV-2. Добавьте стандартные антитела к SARS-CoV-2, нацеленные на RBD, и магнитные шарики, связывающие антитела.
Во время инкубации область Fc-антител связывается с Fc-связывающими доменами гранул. Кроме того, рекомбинантный биорепортер связывается с антителами к SARS-CoV-2, нацеленными на RBD.
После инкубации центрифугируйте смесь. Удалите несвязанный надосадочный клонатрик, содержащий биорепортер. Снова суспензируйте связанные бусины в буфере. Переложите на многолуночный планшет.
Добавьте раствор, содержащий фрагменты белка крупного размера, обладающие высоким сродством к фрагментам белка м
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео