Анализ нейтрализующих антител AAV на основе клеток: колориметрический метод обнаружения нейтрализующих антител против специфических аденоассоциированных вирусов в сыворотке крови
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:54 мин. • July 8th, 2025
Рекомбинантные аденоассоциированные вирусы, rAAV, генетически модифицированные, безоболочечные, одноцепочечные ДНК-вирусы, являются перспективными терапевтическими носителями генов.
rAAV прикрепляются к рецепторам клеточных мембран-мишеней и подвергаются клатрин-опосредованному эндоцитозу, способствуя ядерной доставке генома rAAV и терапевтической экспрессии генов. Тем не менее, нейтрализующие антитела иммунной системы, направленные против rAAV, связываются со специфическим эпитопом rAAV, препятствуя связыванию клеточной мембраны, клеточному проникновению и переносу генов.
Чтобы обнаружить нейтрализующие антитела против специфических rAAV в сыворотке крови овец, сначала получите соответствующие концентрации разбавленной сыворотки. Добавьте рекомбинантные AAV, экспрессирующие плацентарную щелочную фосфатазу человека, hPLAP, ген. Позволяют нейтрализующим антителам связываться и нейтрализовать AAV.
Перенесите эту смесь в лунки многолуночного планшета, содержащего адгезивную культуру эпителиальных клеток человека. После инкубации AAV подвергаются клеточному эндоцитозу. Трансдуцированные клетки экспрессируют hPLAP, связанный с клеточной мембраной. Однако нейтрализованные AAV не могут пр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео