Анализ на персистентность in vitro: метод оценки влияния осмолитов на персистенцию бактерий

При воздействии вредных условий окружающей среды подмножество бактерий переходит в состояние низкой метаболической активности, избегая вредного воздействия. Эти бактерии, называемые персистентами, могут переносить кратковременное воздействие высоких концентраций антибиотиков.

Для изучения влияния осмолитов - малых органических растворенных веществ - на бактериальную персистенцию, во-первых, получают культуру бактериальных клеток в экспоненциальной фазе с ранее существовавшими персистентами ниже предела детекции, суспендированными в средах.

Далее перенесите суспензию в осмолитсодержащие лунки микрочип-планшета. Держите набор лунок без осмолита в качестве контроля. Запечатайте планшет газопроницаемой мембраной, чтобы обеспечить быструю диффузию газа для роста клеток и инкубации.

Осмолиты в среде в соответствующих концентрациях вызывают осмотический стресс, заставляя некоторые клетки перепрограммировать свой клеточный метаболизм с быстрого на медленный рост, образуя персистирующие вещества.

Теперь перенесите обработанные осмолитом и контрольные клетки в планшет для анализа, содержащего антибиотики. Закройте планшет для стойкого анализа и инкубируйте.

В присутствии антибиотиков нормаль