Анализ паралича на основе флуоресцентного репортера: метод оценки возрастного прогрессирующего образования полиглутаминового флуоресцентного репортера и связанного с ним паралича при Caenorhabditis elegans

Клеточный белковый гомеостаз, или протеостаз, включает в себя регуляцию сворачивания и функции белка, а также деградацию неправильно свернутых белков. Во время старения механизм протеостаза ослабевает, в результате чего неправильно свернутые белки накапливаются и далее агрегируются, что приводит к клеточной дисфункции.

Чтобы определить возрастное снижение протеостаза, начните с синхронизированных по развитию, взрослых трансгенных Caenorhabditis elegans.

Мышечные клетки этих червей экспрессируют белки с аномально расширенным полиглутамином, или polyQ, повторами, слитыми с флуоресцентной меткой. Белки PolyQ склонны к неправильному сворачиванию и, следовательно, при накоплении могут образовывать агрегаты.

Перенесите червей на предметное стекло микроскопа, состоящее из агарозной прокладки, и иммобилизуйте с помощью подходящего химического вещества для визуализации живых клеток. Используя флуоресцентный микроскоп, визуализируйте мышцы стенки тела червей в течение определенного периода времени, чтобы определить яркие сигналы флуоресцентных очагов, соответствующие флуоресцентным агрегатам polyQ.

В течение нескольких дней, в связи с возрастным снижением протеоостаза, происходит прогрессиру