Бактериальный коинкубационный анализ: метод на основе флуоресцентной микроскопии для визуализации внутривидовой бактериальной конкуренции на уровне отдельных клеток

Внутривидовая конкуренция между двумя бактериальными штаммами приводит к тому, что штамм ингибитора высвобождает токсичные эффекторные молекулы, которые убивают целевую популяцию.

Чтобы визуализировать конкурентные взаимодействия между двумя грамотрицательными бактериальными штаммами, начните с совместной культуры, содержащей ингибитор и целевой штамм в равных количествах.

Оба штамма спроектированы таким образом, чтобы экспрессировать флуоресцентные белки разного цвета, чтобы визуально дифференцировать их во время визуализации. Концентрируйте культуру, чтобы максимизировать межклеточный контакт между бактериальными штаммами. Нанесите смешанную культуру на покровную пластинку, положенную на дно посуды.

Поместите застывшую агарозную подушечку на пятно, позволяя бактериям обездвижиться, и накройте его еще одним покровным стеклом. Инкубируйте для обеспечения роста бактерий, имитируя условия скученности бактерий.

Клеточная оболочка ингибирующего штамма содержит специализированную секреторную систему – систему секреции шестого типа, или T6SS. Он состоит из мембранного комплекса, опорной пластины и внутренней трубки, окруженной сократительной оболочкой.

При обнаружении контакта штамм инги