Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:54 мин. • July 8th, 2025
Каспаза-3 и каспаза-7 представляют собой протеазы, которые распознают последовательность тетрапептида DEVD в белках-мишенях, расщепляя их на С-конце остатка аспарагиновой кислоты. Они играют заметную роль в каскаде апоптоза - запрограммированной клеточной смерти.
Чтобы оценить активность каспазы-3/7 в апоптотических клетках, начните с пробирки, содержащей эксплант кожи лягушачьего пальца ноги, зараженный грибами, вызывающими апоптоз. Добавьте в трубку подходящий буфер и несколько металлических шариков.
Используйте взбивание шариков, чтобы разрушить клетки кожи и высвободить клеточное содержимое, включая белки каспазы-3/7. Центрифугируйте пробирку, гранулируя остатки клеток и органеллы. Аспирируйте богатую белком надосадочную жидкость из пробирки и пипетки в лунки многолуночного аналитического планшета.
Дополните лунки люминогенным реагентом каспазой. Этот реагент состоит из пролюминесцентной субстраты, содержащей пептид DEVD в буферном растворе, содержащем АТФ, ионы магния и фермент люциферазу.
Перемешайте содержимое лунки и инкубируйте. Во время инкубации каспазы-3/7 расщепляют пролюминесцентный субстрат, высвобождая в раствор аминолюциферин – субстрат для люциферазы.
В присутстви
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео