Анализ эффероцитоза фиксированных клеток: метод изучения эффероцитарного поглощения апоптотических клеток макрофагами с помощью флуоресцентной микроскопии

Клетки, подвергающиеся апоптозу - запрограммированной клеточной смерти - отображают на своей поверхности сигналы «ешьте меня», способствуя деградации фагоцитами - специализированными иммунными клетками. Этот процесс очищения апоптотических клеток называется эффероцитозом.

Для проведения анализа на эффероцитоз сначала берут суспензию апоптотических клеток с двойным окрашиванием. Поверхности этих клеток помечаются биотином, а цитоплазма помечается красителем, отслеживающим клетки, помечая материалы, полученные из апоптотических клеток.

Добавьте клеточную суспензию в культуру адгезивных макрофагальных клеток, которые функционируют как эффероциты. Центрифугирует, форсируя контакт между макрофагами и апоптотическими клетками, и инкубирует.

Эффероцитарные рецепторы на макрофагах связываются с фосфатидилсерином - сигналом «съешь меня» - на мембране апоптотической клетки, способствуя его поглощению. Небольшие фрагменты апоптотической клетки захватываются внутри мембранного везикулы, называемого эфферосомой.

В результате получается эффероцитированная фракция - часть апоптотической клетки внутри макрофага - и неэффероцитированная фракция - неинтернализованная часть апоптотической клетки.

Доб