Анализ флуоресцентной утечки для изучения взаимодействия проникающего пептида с мембраной

Проникающие в клетки пептиды, CPP, короткие, положительно заряженные пептиды, могут взаимодействовать с клеточными мембранами и пересекать их, облегчая доставку непроницаемых для клеток грузов.

Для изучения мембранного проникабилизационного потенциала тестируемого ХТБ in vitro с использованием имитации клеточной мембраны начинают с крупного униламеллярного везикулы, LUV, суспензии.

LUV содержат фосфолипидный бислой, загруженный непроницаемым для мембраны флуоресцентным зондом и соответствующей парой гасителей. В везикулах гаситель взаимодействует с флуоресцентным зондом из-за их непосредственной близости, вызывая гашение флуоресценции.

Пипетируйте суспензию LUV в кварцевую флуоресцентную кювету и разбавьте с помощью буфера. Добавьте магнитную полосу. Перенесите на спектрофлуориметр с магнитным перемешиванием для предотвращения осаждения LUV во время работы. Определите фоновую флуоресценцию, чтобы исключить любые утечки LUV.

Добавляйте желаемую концентрацию CPP в суспензию LUV через равные промежутки времени.

Основываясь на гидрофобности и заряде аминокислотных остатков CPP, они возмущают липидную мембрану LUV, что приводит к проникновению в мембрану и пермеабилизации.

Повреждение м