Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:09 мин. • July 8th, 2025
Чтобы количественно определить содержание растворимого белка в растительной ткани в пробирке, начните с соответствующего количества измельченной, лиофилизированной растительной ткани.
Добавьте в тюбик гидроксид натрия, щелочь, и обработайте ультразвуком. Щелочная среда под воздействием механических сил разрушает клетки, высвобождая внутриклеточное содержимое, в том числе макромолекулы – растворимые белки и углеводы. Инкубируйте при более высоких температурах.
В присутствии тепла щелочь вызывает гидролиз белка, образуя более мелкие пептиды и увеличивая растворимость белка. Кроме того, углеводы расщепляются.
Центрифугируйте смесь. Соберите солюбилизированный белоксодержащий надосадочный жидкость. Добавьте соляную кислоту для нейтрализации pH.
Обработайте пробу трихлоруксусной кислотой, ТСА. ТСА разрушает гидратационную оболочку, окружающую белки, что приводит к агрегации белков и выпадению в осадок.
Центрифугируйте и удалите ТСА-содержащую надосадочную жидкость. Промойте протеиновую гранулу ледяным ацетоном, чтобы удалить остатки ТСА, которые могут повлиять на оценку растворимого белка.
Высушите ацетон на воздухе. Ресуспендируйте белковую гранулу в гидроксиде натрия. Разбавить деиони
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео