Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:34 мин. • July 8th, 2025
Toxoplasma gondii - одноклеточный простейший - это облигатный анаэробный паразит, размножающийся только внутри клеток хозяина.
Чтобы количественно оценить внутриклеточный рост паразита с помощью анализа на основе люциферазы, возьмите суспензию клеток паразита, экспрессирующих люциферазу - фермент, который производит люминесценцию при реакции со своим субстратом. Добавьте суспензию в культуру фибробластов крайней плоти человека и инкубируйте в течение достаточного времени.
Паразит связывается с рецепторами клетки-хозяина и интернализуется через эндоцитарный процесс, образуя паразитофорную вакуоль. Структура обеспечивает нишу для размножения паразита.
После заражения аспирируйте среду, удаляя неинтернализованных паразитов. Добавьте буфер для лизиса, содержащий моющее средство и люциферин – субстрат для люциферазы. Детергент в буфере создает поры в клеточной мембране и полностью лизирует клетки, в результате чего происходит высвобождение люциферазы.
Высвобождаемый фермент окисляет молекулы люциферина, излучая свет. Измерьте интенсивность люминесценции для определения активности люциферазы. Используя реплицируемые лунки, содержащие инфицированные клетки-хозяева, измерьте активность люц
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео