Анализ люциферазы для изучения эффективности противопаразитарных химических веществ против паразитов

Toxoplasma gondii — простейший паразит — размножается исключительно в ядровых клетках животного хозяина. Он проникает в клетки-хозяева через эндоцитарный процесс, образуя паразитофорную вакуоль. Внутри вакуоли паразит поглощает цитозольные белки хозяина, получая питательные вещества для роста.

Чтобы проверить эффективность противопаразитарных химических веществ на паразитов внутри клеток хозяина, возьмите тестовую пластину, содержащую адгезивную культуру фибробластов крайней плоти человека в нескольких лунках.

Внесите в каждую лунку равное количество паразитов токсоплазмы, экспрессирующих люциферазу — фермент, производящий люминесценцию. Инкубируются, позволяя паразитам проникать в клетки-хозяева и расти внутри паразитофорной вакуоли.

После инкубации аспирируйте среду, удаляя не попавших внутрь паразитов. Дополните лунки различными концентрациями цистеинпротеазы, нацеленного на противопаразитарное соединение, и инкубируйте.

Молекулы лекарств проникают в клетку-хозяина, чтобы добраться до паразитов. Попадая внутрь, препарат ингибирует фермент цистеиновую протеазу паразита, нарушая усвоение питательных веществ паразитом-хозяином и останавливая его рост.

Аспирируйте лекарственные сред