Анализ на β-галактозидазу для оценки лекарственно-индуцированной цитотоксичности у паразитов

Trypanosoma cruzi, облигатный внутриклеточный паразит, вторгается в клетки-хозяева млекопитающих как трипомастигота — жгутиковая, непролиферативная стадия развития — и дифференцируется в нежгутиковые амастиготы, которые размножаются в цитоплазме путем бинарного деления.

После пролиферации амастиготы дифференцируются обратно в трипомастиготы, которые нарушают работу клеток хозяина для попадания в кровоток, что приводит к системной инфекции.

Для оценки in vitro цитотоксического потенциала испытуемого противопаразитарного препарата против Trypanosoma cruzi начинают с культуры трансгенных паразитов Trypanosoma cruzi — в желаемой стадии развития — стабильно экспрессирующих фермент β-галактозидазу.

Суспендируйте паразитов в подходящих средах. Переложите на многолуночный планшет. Добавьте соответствующие концентрации испытуемого противопаразитарного препарата. Инкубировать.

Препарат пассивно диффундирует через мембраны паразита и метаболизируется в токсичные промежуточные продукты. Эти метаболиты проникают в ядра и вызывают повреждение ДНК, ингибируя синтез белка, в том числе β-галактозидазы, что негативно влияет на жизнеспособность паразитов.

Замените лекарственную среду буфером, чтобы п