Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:57 мин. • July 8th, 2025
У рыбок данио мелкие твердые частицы в окружающей среде, или PM — загрязнитель воздуха — вызывают сердечные сбои, вызванные окислительным стрессом.
Чтобы изучить влияние ТЧ на рыбок данио-рерио, начните с воздействия на эмбрионы рыбок данио-рерио производного извлекаемого из ТЧ органического вещества, ЭОМ, которое запускает генерацию активных форм кислорода, или АФК.
АФК окисляет основание ДНК гуанин до 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозина или 8-OHdG и вызывает фосфорилирование гистона H2AX с образованием γH2AX — маркера двухцепочечных разрывов ДНК.
После экспонирования препарируйте сердце рыбки данио и поместите его на предметное стекло. Обработайте сердце фиксирующим раствором, который сшивает белки, стабилизируя клеточную структуру.
Затем добавьте блокирующий реагент для предотвращения неспецифических сайтов связывания. Добавьте первичные антитела, которые нацелены на γH2AX и 8-OHdG в сердечных клетках.
Затем добавьте два флуоресцентно меченных вторичных антитела разного цвета, которые специфически связываются с Fc-областью соответствующего первичного антитела. Наконец, окрасьте образец DAPI — ДНК-специфичным красителем, который связывается с минорной бороздкой богатых AT-богатыми пос
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео