Анализ смерти нейронов для оценки гибели клеток в модели эпилепсии ex vivo

Эпилепсия — спонтанные и повторяющиеся припадки в головном мозге — приводит к гибели нейронных клеток.

Чтобы изучить гибель нейронов в модели эпилепсии ex vivo, начните с взятия органотипического среза ринальной коры и гиппокампа, полученного из мозга детеныша крысы, в подходящей среде.

Органотипический срез состоит из ринальной коры и гиппокампа. При постепенной депривации сыворотки эти области демонстрируют развивающиеся эпилептические события, приводящие к гибели нейронов, вызванной судорогами.

Добавьте в культуру необходимое количество йодида пропидия, ПИ — флуоресцентного красителя — и инкубируйте. Через поврежденную клеточную мембрану ПИ проникает в мертвые нейроны и связывается с ДНК; живые нейроны с интактной мембраной не способны к поглощению ПИ.

Поместите органотипический срез на предметное стекло микроскопа для иммуноокрашивания. Добавьте раствор, блокирующий пермеабилизацию, и инкубируйте.

Молекулы детергента в растворе растворяют мембранные липиды, создавая поры в мембране интактных клеток, делая их проницаемыми для последующих этапов иммуноокрашивания. Белки в блокирующем растворе пассивно связываются с неспецифическими участками клеток, снижая фоновое окрашивание.

До