Изучение хемоизбегающего поведения у трансгенных червей с помощью осмотического анализа избегания

У нематод хемосенсорные нейроны (ASH) могут ощущать изменения осмолярности в окружающей среде, вызванные химическими репеллентами. В ответ эти черви удаляются от репеллентов, что приводит к хемоизбегающему поведению.

Аномальная агрегация белков в нейронах ASH может привести к изменениям в поведении, связанном с химиоизбеганием.

Чтобы изучить осмотическое поведение избегания у червей, начните с личинок трансгенных нематод с белковыми агрегатами в нейронах ASH. Обработайте нематод биологически активными соединениями, которые уменьшают агрегацию белка и восстанавливают поведение избегания у некоторых червей.

Переложите обработанных червей на заранее подготовленную непищевую среду, чтобы поддерживать их на личиночной стадии. В центре пластины присутствует глицерин — химическое вещество с высокой осмотической силой, создающий осмотический барьер, разделяющий пластину на две зоны: нормальную и зону ловушек.

Дополните зону ловушки анестезией, чтобы остановить движение червей, которые пересекают барьер. Добавьте каплю бутандиона в зону ловушки, чтобы привлечь всех червей, заставляя их двигаться к ней.

Черви с агрегацией белка не могут ощущать осмотический стресс, пересекают барьерную линию и обезболиваются в зоне ловушки. Черви с восстановленным хемоизбегающим поведением удаляются от глицерина и остаются в пределах нормальной зоны.

Количество червей в нормальной зоне коррелирует с эффективностью биологически активных соединений в восстановлении хемоизбегающего поведения.

Для анализа на осмотическое избегание разделите непищевую пластину NGM на нормальную и ловчую зоны, создав 8-молярную линию глицерина посередине. Затем распределите 200-миллимолярную линию азида натрия на расстоянии около 1 сантиметра от линии глицерина, чтобы парализовать нематоды, проходящие через глицериновый барьер в зону ловушки.

Перенесите около 200 нематод на нормальную зону из трех повторяющихся пластин для каждой группы. Затем добавьте каплю 1% бутандиона в зону ловушки, чтобы привлечь нематод. Немедленно накройте чашку Петри крышкой, и выдерживайте при температуре 23 градуса Цельсия в течение 90 минут.

Подсчитайте количество нематод в обеих зонах под микроскопом и рассчитайте индекс предотвращения.