Анализ раны для оценки миграционной способности мышиных миобластов в кокультуре

0 views • 5:00 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В ответ на рану секреторные клетки вырабатывают паракринные сигнальные молекулы для активации миобластов — недифференцированных мышечных клеток. Активированные миобласты мигрируют к месту раны, где они размножаются, вызывая заживление раны.

Чтобы оценить миграционную способность миобластов in vitro, берут многолуночный планшет, содержащий сливающийся монослой мышиных миобластов. С помощью наконечника для пипетки поцарапайте монослой, чтобы создать линейный участок без клеток внутри лунки, который имитирует место раны.

Аккуратно дополните лунку питательной средой, не потревожив раневой участок.

Возьмите мембранный вкладыш, содержащий адгезивную культуру клеток нервного гребня, или NCC — секреторных клеток — в подходящей среде. Поместите вставку внутрь лунки так, чтобы НКЦ у основания находились рядом с раневым пятном. Инкубируйте совместную культуру в течение желаемой продолжительности.

Во время инкубации НКК высвобождают сигнальные молекулы, которые связываются со специфическими рецепторами на миобластах, инициируя сигнальный каскад. Эта сигнализация способствует реорганизации актина в миобластах, в результате чего эти клетки развивают цитоплазматические выступы, такие как ламеллиподии и филоподии, на своих краях. Эти проекции помогают миобластам мигрировать к раненой области и постепенно заселяться, что приводит к заживлению раны.

Поместите планшет под микроскоп и наблюдайте за заживлением ран, степень которого коррелирует с миграционной способностью миобластов при совместном культивировании.

Когда клетки достигнут 70-80% слияния, хорошо удалите надосадочную среду из камеры C2C12 и промойте клетки PBS.

После удаления PBS начните царапать клетки, плотно проводя стерильным наконечником пипетки P10 в одном направлении, чтобы охватить всю длину или ширину монослоя клеток. Как только клетки будут поцарапаны, быстро добавьте 1 миллилитр PBS.

Далее включите компьютер и микроскоп. Поместите камерный слайд на сцену и поверните диск объектива в 5-кратное увеличение. Откройте программное обеспечение для обработки изображений, перейдите на вкладку «Камера», а затем нажмите кнопку «В реальном времени», чтобы визуализировать ячейки на вкладке «AxioCam IC».

Убедитесь, что светофильтр полностью вытянут, чтобы свет мог проникать на камеру и экран компьютера. Вручную переместите или поверните предметное стекло камеры, чтобы расположить область раны в центре изображения в реальном времени на вкладке «AxioCam IC». Чтобы сделать снимк, нажмите «Snap», чтобы открыть вкладку «New» рядом с вкладкой «AxioCam IC», содержащей изображение.

Чтобы сохранить это неподвижное изображение, нажмите на кнопку «Файл», выберите «Сохранить как», выберите «Рабочий стол» на панели слева, чтобы сохранить файл на рабочем столе. Введите «Имя файла» в поле «Имя файла» и сохраните рисунок в формате файла «.czi».

Чтобы сохранить изображение как «.tiff», нажмите «Файл», выберите «Сохранить как», введите «Имя файла» в поле имени файла, нажмите кнопку «Сохранить как тип» и выберите «*.tiff» в раскрывающемся меню.

Вручную переместите предметное стекло патронника, чтобы сделать еще два-три снимка в других точках раны в той же лунке. После визуализации удалите PBS из каждой лунки и добавьте 1 миллилитр среды C2C12.

Соберите систему совместного культивирования лунок с вставками, вручную поместив вкладыши, содержащие клетки O9-1, в каждую лунку лунки камеры. Осторожно вставьте вставки в лунку так, чтобы дно вставки находилось чуть выше нижележащих ячеек C2C12. Верните конструкции с колодцем в инкубатор и дайте клеткам мигрировать в общей сложности на 9-12 часов.

Чтобы определить оптимальное время миграции, проверяйте клетки через шесть часов после создания раны, а затем каждые два-три часа после этого. Заканчивайте эксперимент, когда клетки в контрольных условиях полностью покроют рану.

08:34

Микроскопия на основе методов для оценки миграции эпителиальных клеток во время в Vitro заживление ран

Related Videos

0 Views

09:24

В пробирке Поцарапать Assay для демонстрации воздействия мышьяка на миграции клеток кожи

Related Videos

0 Views

09:34

Царапина Миграция Анализ и Dorsal Skinfold камеры для in Vitro и In Vivo Анализ раны исцеления

Related Videos

0 Views

08:26

Количественный Анализ сотового мигрантах мышиных кишечных нейронных прародителей

Related Videos

0 Views

09:55

В пробирке миграции клеток и Вторжение Анализы

Related Videos

0 Views

08:40

Оптимизация раны царапинам анализе для обнаружения изменений в мышиной мезенхимальных стромальных клеток миграции после повреждения по растворимый экстракт сигаретного дыма

Related Videos

0 Views

07:14

Пробирного CFSE основе для изучения миграции мышиной кожи дендритных клеток в Опорожнение лимфатических узлов во время инфекции с Mycobacterium Bovis Кальметта-Герена

Related Videos

0 Views

11:20

Оценка вторжения клеток и процесс миграции: сравнение видео на базе микроскопа нуля раны пробирного и пробирной палаты Бойдена

Related Videos

0 Views

08:55

Роман в Vitro раны исцеления Assay для оценки миграции клеток

Related Videos

0 Views

09:19

Один анализ культуры миофибры для оценки функциональности взрослых мышечных стволовых клеток Ex Vivo

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026