Анализ раны для оценки миграционной способности мышиных миобластов в кокультуре

В ответ на рану секреторные клетки вырабатывают паракринные сигнальные молекулы для активации миобластов — недифференцированных мышечных клеток. Активированные миобласты мигрируют к месту раны, где они размножаются, вызывая заживление раны.

Чтобы оценить миграционную способность миобластов in vitro, берут многолуночный планшет, содержащий сливающийся монослой мышиных миобластов. С помощью наконечника для пипетки поцарапайте монослой, чтобы создать линейный участок без клеток внутри лунки, который имитирует место раны.

Аккуратно дополните лунку питательной средой, не потревожив раневой участок.

Возьмите мембранный вкладыш, содержащий адгезивную культуру клеток нервного гребня, или NCC — секреторных клеток — в подходящей среде. Поместите вставку внутрь лунки так, чтобы НКЦ у основания находились рядом с раневым пятном. Инкубируйте совместную культуру в течение желаемой продолжительности.

Во время инкубации НКК высвобождают сигнальные молекулы, которые связываются со специфическими рецепторами на миобластах, инициируя сигнальный каскад. Эта сигнализация способствует реорганизации актина в миобластах, в результате чего эти клетки развивают цитоплазматические выступы, такие как ламеллип