Иммуноферментный анализ для верификации химически связанных конъюгатов антитело-антиген

Чтобы вызвать иммунный ответ, антигены связываются с антителами, специфичными для эндоцитарных рецепторов, присутствующих на поверхности дендритных клеток, или ДК — антигенпрезентирующих клеток, которые помогают в поглощении антигенов.

Образование комплекса антитело-антиген является важным этапом и может быть достигнуто in vitro путем химического связывания антигена с моноклональным антителом, нацеленным на DC.

Чтобы проверить эффективность процесса конъюгации, начните с планшета ИФА, предварительно покрытого захваченными антителами. Обработайте пластину блокирующим раствором, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антигенов с поверхностью покрытия.

Добавьте в планшет химически сшитые конъюгаты антитела-антиген и инкубируйте. Специфический эпитоп антигена взаимодействует с паратопом захваченного антитела, образуя комплекс антитело-антиген-антитело.

Затем наложите на пластину третий набор антител, связанных с ферментом. Эти антитела специфически связываются с первичными антителами, присутствующими в конъюгате, что позволяет его обнаруживать.

Добавьте буфер, содержащий хромогенный субстрат, чтобы визуализировать конъюгаты. Фермент, прикрепленный к антителу, вступает в реакцию