Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:19 мин. • July 8th, 2025
Воздействие вредных агентов вызывает одно- и двухцепочечные разрывы в клеточной ДНК, которые приводят к повреждению ДНК.
Чтобы обнаружить повреждение ДНК, начните с одноклеточной суспензии химически обработанных клеток в сжиженной агарозе с низкой температурой плавления. Загрузите суспензию на предметное стекло и дайте агарозе застыть, что позволит иммобилизовать клетки внутри пористой гелевой матрицы.
Обработайте клетки лизисным буфером. Детергенты в буфере растворяют клеточные и ядерные мембраны, в то время как соли удаляют гистоны из ДНК, образуя нуклеоидное тельце, содержащее ДНК, прикрепленную к ядерной матрице.
Инкубируйте предметные стекла в щелочном буфере для электрофореза. Это заставляет ДНК раскручиваться и генерировать одноцепочечные фрагменты. Поместите предметное стекло в аппарат для электрофореза, и подключите его к источнику питания. Это позволяет мигрировать отрицательно заряженной ДНК к положительному аноду.
Неповрежденная ДНК остается ограниченной в нуклеоидном теле. Напротив, более мелкие, поврежденные фрагменты ДНК начинают двигаться к аноду. Это дифференциальное движение образует кометоподобную структуру, в которой неповрежденная ДНК образует голову, а поврежд
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео