Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:04 мин. • July 8th, 2025
Транспортеры аминокислот представляют собой мембраносвязанные белки, которые опосредуют перенос аминокислот через клеточные мембраны, регулируя жизненно важные клеточные процессы.
Для изучения поглощения аминокислот in vitro берут культуру стромальных клеток, полученных из костного мозга мыши. Отсасывайте питательную среду. Добавьте предварительно подогретый буфер с добавлением глутамина — аминокислоты, меченной радиоактивным водородом. Инкубируйте в течение необходимого времени.
Предварительно нагретый буфер обеспечивает физиологическую температуру и соответствующий рН, необходимые для поглощения глютамина клетками. Транспортеры глутамина состоят из транспортных доменов, отвечающих за транслокацию субстрата через котранспорт с ионами натрия, и мембранно-закрепленных доменов каркаса.
Транспортный домен связывается с меченым глутамином вместе с ионами натрия из буфера. После связывания он высвобождает молекулы в цитоплазму. Одновременно транспортный домен перемещает внутриклеточные ионы натрия и нейтральные аминокислоты за пределы клетки, что приводит к клеточному гомеостазу.
Промойте клетки ледяным буфером, завершив реакцию и удалив весь внеклеточный глутамин, меченный радиоактивны
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео