Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:00 мин. • July 8th, 2025
Гликогенсинтаза ― важнейший фермент в синтезе гликогена ― расщепляет уридиндифосфатную глюкозу, или UDP-глюкозу ― нуклеотидный сахар ― на UDP и гликозильный остаток и добавляет высвобожденный мономер глюкозы к растущей гликогеновой цепи.
Чтобы оценить активность гликогенсинтазы, начните с приема в пробирке реакционной смеси, содержащей гликоген, UDP-глюкозу, АТФ, фосфоенолпируват и никотинамидадениндинуклеотид (NADH). Добавьте нуклеозиддифосфат или NDP, фермент киназу и коктейль ферментов пируваткиназы и лактатдегидрогеназы. Смешайте содержимое и инкубируйте.
Добавьте в пробирку образец, содержащий гликогенсинтазу, чтобы инициировать ферментативную реакцию.
Гликогенсинтаза действует на УДФ-глюкозу, образуя УДФ и гликозильный остаток. Фермент поглощает свободный мономер глюкозы и включает его в гликогеновую цепь реакционной смеси. В присутствии АТФ NDP-киназа реакционной смеси фосфорилирует неиспользованный UDP, превращая его в UTP и генерируя ADP.
Фермент пируваткиназа действует на АДФ и добавляет фосфат, пожертвованный фосфоенолпируватом реакционной смеси, для производства АТФ и пирувата. Затем лактатдегидрогеназа превращает пируват в лактат и окисляет НАДН в ходе реакции.
Измерьт
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео